Zelula-kulturaren abantaila nagusietako bat zelulen ugalketaren kimika fisikoa (hau da, tenperatura, pH, presio osmotikoa, O2 eta CO2 tentsioa) eta ingurune fisiologikoa (hau da, hormona eta nutrienteen kontzentrazioa) manipulatzeko gaitasuna da.Tenperaturaz gain, hazteko medioak kontrolatzen du hazkuntza-ingurunea.
Kulturaren ingurune fisiologikoa bere ingurune fisiko eta kimikoa bezain argia ez den arren, serumaren osagaiak hobeto ulertzea, ugaltzeko beharrezkoak diren hazkuntza-faktoreak identifikatzea eta kultiboko zelulen mikroingurunea hobeto ezagutzea.(Hau da, zelula-zelula elkarrekintza, gas-difusioa, matrizearekiko elkarrekintza) orain zelula-lerro jakin batzuk serumik gabeko medioetan hazten dira.
1.Kultura inguruneak zelulen hazkuntzan eragiten du
Kontuan izan zelula-hazkuntzaren baldintzak desberdinak direla zelula mota bakoitzeko.
Zelula-mota jakin baterako beharrezkoak diren hazkuntza-baldintzetatik aldentzearen ondorioak fenotipo anormalen adierazpenetik zelula-kulturaren erabateko porrotaraino doa.Horregatik, interesatzen zaizun zelula-lerroa ezagutzea gomendatzen dizugu eta zure esperimentuan erabiltzen duzun produktu bakoitzerako emandako argibideak zorrotz jarraitzea.
2.Zure zelulentzako zelulen kultura ingurune optimizatua sortzeko neurriak:
Kultura-euskarria eta sueroa (ikus behean informazio gehiago lortzeko)
pH eta CO2 maila (ikus behean informazio gehiago lortzeko)
Landu plastikoa (ikus behean informazio gehiago lortzeko)
Tenperatura (ikus behean informazio gehiago lortzeko)
2.1 Kultura Hedabideak eta Seruma
Kultura-euskarria da hazkuntza-ingurunearen zatirik garrantzitsuena, zelulen hazkuntzarako beharrezkoak diren mantenugaiak, hazkuntza-faktoreak eta hormonak ematen dituelako, eta kulturaren pH-a eta presio osmotikoa erregulatzen dituelako.
Hasierako zelula-hazkuntzako esperimentuak ehun-estraktuetatik eta gorputz-fluidoetatik lortutako medio naturalak erabiliz egin baziren ere, estandarizazioaren, medioen kalitatearen eta eskariaren handitzearen beharrak behin betiko medioak garatzea ekarri zuen.Oinarrizko hiru euskarri motak euskarri basalak, serum media murriztuak eta suerorik gabeko euskarriak dira, eta serumaren osagarrirako baldintza desberdinak dituzte.
2.1.1 Oinarrizko euskarria
Gibco zelula-kultura medio
Zelula-lerro gehienak ondo hazten dira aminoazidoak, bitaminak, gatz ez-organikoak eta karbono iturriak (glukosa adibidez) dituzten oinarrizko medioetan, baina oinarrizko mediaren formulazio hauek serumarekin osatu behar dira.
2.1.2 Serum-medio murriztua
Gibco Low Serum Medium duen botila
Serumaren ondorio kaltegarriak murrizteko beste estrategia bat zelula-kulturako esperimentuetan serum gutxitutako medioak erabiltzea da.Serum ertain murriztua nutrienteetan eta animalietatik eratorritako faktoreetan aberatsa den oinarrizko ertain formula da, beharrezkoa den serum kopurua murrizteko.
2.1.3 Serumik gabeko medioa
Gibco serumik gabeko euskarria duen botila
Serumik gabeko medioak (SFM) animalien serumaren erabilera saihesten du, seruma nutrizio eta hormona formulazio egokiekin ordeztuz.Lehen mailako kultura eta zelula-lerro askok serumik gabeko ertainen formulazioak dituzte, Txinako Hamster Obarioa (CHO) proteina birkonbinatzailea ekoizteko lerroa barne, hibridoma zelula-lerro ezberdinak, Sf9 eta Sf21 (Spodoptera frugiperda) intsektu-lerroak, baita birusa ekoizteko ostalariarena ere. (adibidez, 293, VERO, MDCK, MDBK), etab. Serumik gabeko euskarri bat erabiltzearen abantaila nagusietako bat zelula-mota zehatzetarako medioa hautakorra egiteko gaitasuna da, hazkuntza-faktoreen konbinazio egoki bat hautatuz.Ondorengo taulan serumik gabeko euskarriak dituzten abantailak eta desabantailak zerrendatzen dira.
Abantaila
Argitasuna areagotu
Errendimendu koherenteagoa
Arazketa eta prozesaketa errazagoa
Zelulen funtzioa zehaztasunez ebaluatzea
Produktibitatea handitu
Erreakzio fisiologikoak hobeto kontrolatzea
Zelula-komunikabideen detekzio hobetua
Desabantaila
Zelula mota ertaineko formula espezifikoen eskakizunak
Erreaktiboen purutasun handiagoa behar da
Hazkundearen moteltzea
2.2.1 pH maila
Ugaztunen zelula-lerro normal gehienak ondo hazten dira pH 7,4-n, eta zelula-lerro desberdinen arteko desberdintasunak txikiak dira.Hala ere, eraldatutako zelula-lerro batzuk hobeto hazten direla ingurune azido samarrean (pH 7,0 - 7,4), fibroblasto-lerro zelula arrunt batzuek ingurune apur bat alkalinoa hobesten dute (pH 7,4 - 7,7).Sf9 eta Sf21 bezalako intsektuen zelula-lerroak hobekien hazten dira 6,2 pH-an.
2.2.2 CO2 maila
Hazkuntza-medioak kulturaren pH-a kontrolatzen du eta kulturako zelulak tamponatzen ditu pH-aren aldaketei aurre egiteko.Normalean, tampone hori organikoak (adibidez, HEPES) edo CO2 bikarbonatoan oinarritutako tamponak edukiz lortzen da.Disolbatutako karbono dioxidoaren (CO2) eta bikarbonatoaren (HCO3-) oreka delikatuaren menpe dagoenez medioaren pHa, CO2 atmosferikoaren aldaketek medioaren pHa aldatuko dute.Hori dela eta, CO2-bikarbonatoan oinarritutako buffer batekin tamponatutako medio bat erabiltzean, beharrezkoa da CO2 exogenoa erabiltzea, batez ere zelulak hazkuntza-plateretan hazten direnean edo eraldatutako zelula-lerroak kontzentrazio altuetan hazten direnean.Ikertzaile gehienek airean % 5-7 CO2 erabiltzen duten arren, zelula-kulturako esperimentu gehienek % 4-10 CO2 erabiltzen dute.Hala ere, medio bakoitzak gomendatutako CO2 tentsioa eta bikarbonato kontzentrazioa ditu pH eta presio osmotiko egokia lortzeko;informazio gehiago lortzeko, ikusi ertainen fabrikatzailearen argibideak.
2.3 Plastikoak lantzea
Zelula-hazkuntzako plastikoak hainbat forma, tamaina eta gainazal daude eskuragarri, zelula-kultura aplikazio ezberdinetara egokitzeko.Erabili zelula-kulturaren plastikozko gainazaleko gida eta zelula-hazkuntzako edukiontziaren gida zure zelula-kultura aplikaziorako plastiko egokia aukeratzen laguntzeko.
Ikusi Thermo Scientific Nunc zelula-kulturako plastiko guztiak (iragarki-esteka)
2.4 Tenperatura
Zelula-hazkuntzarako tenperatura optimoa zelulak isolatuta dauden ostalariaren gorputz-tenperaturaren araberakoa da hein handi batean, eta neurri txikiagoan tenperatura-aldaketa anatomikoen araberakoa da (adibidez, larruazaleko tenperatura hezur-muskuluarena baino txikiagoa izan daiteke. ).Zelula-kulturarako, gainberotzea gehiegi berotzea baino arazo larriagoa da.Hori dela eta, inkubagailuko tenperatura tenperatura optimoaren apur bat azpitik ezarri ohi da.
2.4.1 Hainbat zelula-lerrotarako tenperatura optimoa
Giza eta ugaztunen zelula-lerro gehienak 36 °C eta 37 °C artean mantentzen dira hazkuntza optimorako.
Intsektuen zelulak 27 °C-tan lantzen dira hazkuntza optimorako;astiroago hazten dira tenperatura baxuagoetan eta 27°C eta 30°C arteko tenperaturan.30 °C-tik gora, intsektuen zelulen bizitasuna gutxitzen da, nahiz eta 27 °C-ra itzuli, zelulak ez dira berreskuratuko.
Hegazti-lerroek 38,5 °C-ko tenperatura behar dute hazkuntza maximoa lortzeko.Zelula hauek 37°C-tan mantendu daitezkeen arren, polikiago haziko dira.
Odol hotzeko animalietatik (adibidez, anfibioak, ur hotzeko arrainak) eratorritako zelula-lerroek 15 °C eta 26 °C arteko tenperatura tarte zabala jasan dezakete.
Argitalpenaren ordua: 2023-01-01