Zelula-kulturen kutsadura erraz bihur daiteke zelula-kultur laborategietan arazo ohikoena, batzuetan ondorio oso larriak eraginez.Zelula-hazkuntzako kutsatzaileak bi kategoriatan bana daitezke: kutsatzaile kimikoak, esate baterako, erdia, seruma eta uraren ezpurutasunak, endotoxinak, plastifikatzaileak eta garbigarriak, eta kutsatzaile biologikoak, hala nola bakterioak, lizunak, legamia, birusak, mikoplasmak gurutzatutako infekzioa.Beste zelula-lerro batzuek kutsatuta.Kutsadura guztiz ezabatzea ezinezkoa den arren, haren maiztasuna eta larritasuna murrizten dira jatorria ondo ulertuz eta teknika aseptiko onak jarraituz.
1.Atal honetan kutsadura biologiko mota nagusiak zehazten dira:
Bakterioen kutsadura
Molde eta birusen kutsadura
Mikoplasmaren kutsadura
Legamiaren kutsadura
1.1 Bakterioen kutsadura
Bakterioak nonahiko mikroorganismo zelulabakarren talde handi bat dira.Mikra gutxiko diametroa izan ohi dute eta hainbat forma izan daitezke, esferetatik hasi eta hagatxoetara eta espiraletaraino.Beren nonahikotasuna, tamaina eta hazkuntza-abiadura azkarra dela eta, bakterioak dira, legamia eta lizunekin batera, zelula-kulturan kutsatzaile biologiko ohikoenak.
1.1.1 Bakterioen kutsadura detektatzea
Bakterioen kutsadura erraz antzematen da kulturaren ikuskapenaren bidez, kutsatu eta egun gutxiren buruan;
Infektatutako kulturak normalean lainotuta agertzen dira (hau da, uherak), batzuetan gainazalean film mehe batekin.
Kultura-medioaren pH-aren bat-bateko jaitsierak ere maiz aurkitzen dira.
Potentzia baxuko mikroskopio batean, bakterioak zelulen artean pikor txiki eta mugikor gisa agertzen dira, eta potentzia handiko mikroskopio baten bidez behatzeak bakterio indibidualen formak ebatzi ditzake.
1.2 Moldeak eta birusak kutsatzea
1.2.1 Moldearen kutsadura
Moldeak onddoen erreinuko mikroorganismo eukariotoak dira, hifa izeneko harizpi zelulaniztunetan hazten direnak.Zelulaniztun harizpi horien sare konektiboek genetikoki koloniak edo mizelio izeneko nukleo berdinak dituzte.
Legamiaren kutsaduraren antzera, kulturaren pH-a egonkor mantentzen da kutsaduraren hasierako fasean eta gero azkar handitzen da, kultura larriki kutsatzen den heinean eta lainotu egiten den heinean.Mikroskopioan, mizelioa harizpitsua izan ohi da, batzuetan espora multzo trinko gisa.Molde askoren esporak ingurune oso gogor eta abegitsuetan biziraun daitezke loaldi-fasean eta hazkuntza-baldintza egokiak aurkitzen direnean bakarrik aktibatzen dira.
1.2.2 Birusen kutsadura
Birusak ugaltzeko zelula ostalariaren makineria hartzen duten agente infekziosiko mikroskopikoak dira.Haien tamaina oso txikiak zaildu egiten ditu kulturan hautematea eta zelula-kulturako laborategietan erabiltzen diren erreaktiboetatik kentzea.Birus gehienek oso baldintza zorrotzak dituztenez ostalarientzat, normalean ez diete kalterik eragiten ostalaria ez den espezieen zelula-kulturei.
Hala ere, birusak infektatutako zelula-kulturak erabiltzeak arrisku larria sor dezake laborategiko langileen osasunerako, batez ere giza edo primate-zelulak laborategian hazten badira.
Zelula-kulturetan infekzio birikoa detektatu daiteke mikroskopia elektronikoaren bidez, antigorputz multzo batekin immunotindatuz, ELISA edo PCR-en abiarazle biral egokiekin.
1.3 Mikoplasmaren kutsadura
Mikoplasmak zelula hormarik gabeko bakterio sinpleak dira, eta organismo auto-erreplikatzaile txikienak direla uste da.Oso tamaina txikia dutenez (mikra 1 baino txikiagoa izan ohi da), mikoplasmak antzematea zaila da dentsitate oso altuetara iritsi arte eta zelula-kulturak hondatzea eragiten duten arte;Ordura arte, normalean ez dago infekzio zantzu nabaririk.
1.3.1 Mikoplasmaren kutsadura detektatzea
Hazkunde moteleko mikoplasma batzuek hazkuntzan iraun dezakete zelulen heriotza eragin gabe, baina hazkuntzako zelula ostalarien portaera eta metabolismoa aldatzen dute.
Mikoplasmaren infekzio kronikoa zelulen ugalketa-tasa murriztua, saturazio-dentsitatea gutxitzea eta aglutinazioa esekidura-kulturan izan daitezke.
Hala ere, mikoplasmaren kutsadura detektatzeko modu fidagarri bakarra kultura aldian-aldian probatzea da fluoreszenteak (adibidez, Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunotinketa, autorradiografia edo mikrobioen probak erabiliz.
1.4Legamiaren kutsadura
Legamiak onddoen erreinuko eukarioto zelulabakarrak dira, mikra gutxi batzuetatik (normalean) 40 mikraraino (gutxitan) bitartekoak dira.
1.4.1Legamiaren kutsadura detektatzea
Bakterioen kutsadurarekin gertatzen den bezala, legamiaz kutsatutako kulturak lainotu egin daitezke, batez ere kutsadura fase aurreratuan badago.Legamiarekin kutsatutako kulturen pHa oso gutxi aldatzen da kutsadura larriagoa izan arte, eta fase horretan pHa handitu ohi da.Mikroskopioan, legamia partikula oboide edo esferiko indibidual gisa agertzen da eta partikula txikiagoak sor ditzake.
2.Infekzio gurutzatua
Mikrobioen kutsadura bezain ohikoa ez den arren, zelula-lerro asko HeLarekin eta hazten diren beste zelula-lerro batzuekin kutsadura gurutzatua argi eta garbi definitutako arazo bat da, ondorio larriak dituena.Lortu zelula-lerroak izen handiko zelula-bankuetatik, aldian-aldian egiaztatu zelula-lerroen ezaugarriak eta erabili teknika aseptiko onak.Praktika hauek kutsadura gurutzatua saihesten lagunduko dizute.DNA hatz-markak, kariotipizazioak eta isotipizazioak zure zelula-kulturan kutsadura gurutzatua dagoen ala ez baiezta dezakete.
Mikrobioen kutsadura bezain ohikoa ez den arren, zelula-lerro asko HeLarekin eta hazten diren beste zelula-lerro batzuekin kutsadura gurutzatua argi eta garbi definitutako arazo bat da, ondorio larriak dituena.Lortu zelula-lerroak izen handiko zelula-bankuetatik, aldian-aldian egiaztatu zelula-lerroen ezaugarriak eta erabili teknika aseptiko onak.Praktika hauek kutsadura gurutzatua saihesten lagunduko dizute.DNA hatz-markak, kariotipizazioak eta isotipizazioak zure zelula-kulturan kutsadura gurutzatua dagoen ala ez baiezta dezakete.
Argitalpenaren ordua: 2023-01-01